ELISA实验标本易出的七大问题,您知晓多少?

在ELISA实验检测过程中，标本质量可以说是最重要的关键因素。如果实验标本质量不过关，即使您的实验操作技术再腻害也无济于事。大家来看看在ELISA实验中，标本都容易出现的七大问题及解决办法：          

1．凝血不充分：

  此类错误排在第一位，主要是抗凝血中存在小凝块，多发生在血常规检测中，为采血后标本没有充分颠倒混匀所致；另外，标本量过多，由于抗凝剂的相对不足，血浆中出现微血凝块的可能性增加。微血凝块除易阻塞检测仪器外，由于血液内部分成分的消耗而影响检测结果。一份只有仔细检查才能发现小凝块的标本，可以使血小板降低30%甚至更多，红细胞、白细胞计数也可以降低10%左右。我们规定，对用于血常规的标本均轻轻颠倒并仔细观察，绝大部分可以检查出。
2．抗凝剂与血液比例不正确：
  在凝血功能测定中，常有一些标本量明显不足，特别是儿童和入院检查病人标本，由于小孩采血难，入院时需检查项目多，最易发生抽血量不足，使PT、KPTT和TT假性延长，将误导临床诊治。因此，血液未到刻度的标本一律退回重抽。
3．标本溶血：
  许多指标在红细胞内和血清（血浆）明显不同，溶血可使LDH、HBDH、血K+、AST 、ALT或等值异常升高。此类错误是采血时的一些不良习惯造成，如：压脉时间过长，采血不顺利、抽血速度太快、血液注入容器时未取下针头或用力过猛、等均可造成溶血。我们作过实验，选择20位体格检查者，用两种方法进行比较：⑴用注射器抽血后不去除针头直接将针头插入真空采血管，这时在真空管负压作用下针管内的血液被吸入；⑵用注射器抽血后先除去针头，然后打开真空采血管盖子缓缓注入标本，两种采血方法的标本同时作部分生化项目检测，结果是：前者比后者LDH上升23.4%－58.2%，平均33.7%；HBDH上升22.5%－61.4%，平均35.4%；AST上升6.7%－31.6%，平均13.7%；ALT上升4.7%－18.2%，平均11.4%；血K+上升23.7%－71.2%，平均36.1%，其它如TP、GGT和UREA等也有或多或少的变化。因此，我们主张用真空采血系统自然流出的标本为宜，如果必须用注射器抽血，抽血后要取下针头，再缓缓将血液注入标本采集管。对于未用真空采血系统的单位，若注射器和针头连接不紧，采血时有空气进入或产生泡沫，使用劣质采血器，标本收集管没有干燥均易造成溶血。
4．采血部位不当：
  有些病人需多次检查，或输液时间较长，有的护士会在病人输液更换瓶子时放出一些血液送检，即使先去除前面的10ml血液，结果也有明显变化。如一例输脂肪乳后直接从输液的静脉中采血，导致了许多结果错误，影响前三位的是：TG为12.4mmol/L(平时为1.0 mmol/L左右)，血小板达560×109/L（上升了4倍多），总蛋白浓度从60左右上升到91.6(g/L)。其它常有明显影响的有血糖、血电解质等项目。虽临床也知道正确的采血方法，但由于护理人员流动性大，工作量超负荷，不时有此类标本送检，只有反复与临床沟通、宣传，加上对标本审核，对于血细胞比例明显不对，结果不合理或有异常变化，及时与临床联系，减少不合格报告发出。
5．采血量不足：
  对于血培养而言,采血过少可降低培养的阳性率。有文献报告,当培养的血量从2ml增加至20ml时,血培养的阳性率增加30%—50%,培养血量每增加1ml,阳性率增加3%—5%。由于标本已经注入培养瓶，不能检查是否符合要求，只有加强沟通交流，共同努力提高检验质量。
6．标本采集时间不当：
  对细菌培养、激素检查、找疟原虫或丝虫病原体，需在特定的时间，以提高阳性率。
7．标本运送和处理不及时：
   标本的运送虽不属采集范畴，但标本采集再规范，若不能及时送检，将严重影响检验质量。尿常规标本需在二小时内检测完成，否则细胞等有形成分开始破坏；离体过长的标本作血细胞分析时会影响分类结果；生化检测的标本也因为细胞内外物质交换而变化。我们要求标本及时送检，到检验中心的标本尽快测定，不能及时测定的生化、免疫等标本及时分离血清，加盖并置4℃冷藏。