细胞培养怎么换液？

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　　　　细胞培养怎么换液？

细胞处于旺盛增殖期后，消耗了培养基中的营养，产生的细胞代谢产物对细胞继续增殖产生不利影响，因此需要及时更换培养基，这一过程称为换液。

 

环境准备：相对密封、防尘、防菌的无菌室

 

操作者准备：双手清洁呈可操作状态

 

物品准备：超净工作台、CO2培养箱、95%酒精灯、PBS、（较常用）、10 S（DMEM）(根据需要)、巴氏吸管、75%酒精棉球罐、废液缸。

 

(a)细胞换液步骤:

 

1. 打开层流，打开层流间和超净台的紫外线灯，废液缸和吸管同时照射；

 

2. 把水浴锅调整到37℃ 并使其稳定；

 

3. 将新鲜培养基放置到水浴锅中，注意防止水面高于瓶肩，100ml液体保持10分钟，（200ml液体保持15分钟，500ml液体保持20分钟），间或摇动；

 

4. 着无菌服装，帽子，口罩和手套

 

5. 用75%乙醇消毒培养基瓶外壁，放置到超净台上；

 

6. 将细胞培养瓶取出，用75%乙醇棉球消毒瓶底；

 

7. 用吸管吸弃旧培养基，更换吸管，于非细胞培养面加入新鲜培养基；

 

8. 记录实验过程和细胞培养瓶号。

 

(b)注意事项：

 

1、全程无菌操作观念要强；

 

2、加培养液时，不可直接加到细胞贴壁的面上。