细胞传代操作步骤

一、贴壁细胞传代

1. 1.提前将培养基、PBS放入37℃水浴锅内预热，用75%酒精擦拭后再放入超净台内。

2. 2.吸除或倒掉细胞瓶内旧培养液，加少量PBS润洗细胞。

3. 3.加入适量胰酶，使胰酶的量能盖住细胞，37℃孵育，每隔2~3min显微镜下观察，待贴壁细胞间间隙变大、细胞趋于圆形但还未漂起时弃去胰酶，加入新鲜培养基，晃动细胞瓶，终止胰酶作用。

4. 4.用吸管小心吹打贴壁的细胞，制成细胞悬液。控制吹打的力度，避免产生大量的气泡。

5. 5.将细胞悬液分别接种到另外的2~3个细胞瓶内，加入新鲜培养基，置37℃温箱培养，隔天观察贴壁生长情况。

二、悬浮细胞传代

1. 1.将细胞悬液转移到无菌离心管内，1000rpm离心5min。

2. 2.弃去上清，加入新鲜的培养基，用吸管小心吹散沉淀，制成细胞悬液。

3. 3.将细胞悬液分别接种到另外的2~3个细胞瓶内，加入新鲜培养基，置37℃温箱培养。