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WB实验背景很脏是什么原因？该如何解决？
Western Blot实验可以说是生物专业最基本的实验了，然而，虽然WB实验天天做，但是正常高清的的结果大图并不是你想有就能有。
WB实验出现最多问题的，应该就是背景的问题了。
你想一下，好不容易实验过五关斩六将做到最后一步，结果一看，是这样的：
那真的是让人非常郁闷了。
为什么明明跑出了趋势，但就是背景脏?怎么让自己的条带不因脏脏的背景而毁了呢?
这里要清楚一点，背景脏不一定是因为仪器不干净造成的，也有可能是蛋白降解或者整个实验过程中条件不对造成的，有可能是以下的环节出了问题：
1、实验准备
提取蛋白所需的研磨器材，以及电泳仪的玻璃板、梳子要清洗干净;
若长期不使用，建议玻璃板之间用纸隔开，或者放在置物架上，避免长期放置后，玻璃板黏连在一起。
2、提取蛋白
选择合适的蛋白裂解液，充分去除一些干扰因素，比如核酸，多糖，脂类等;
建议蛋白分装在0.2ml的Ep管中，避免反复冻融使某些蛋白发生改变;
同时要注意Loading buffer的保质期，每次加完之后要充分混匀，再去煮沸。
3、制胶
玻璃板夹紧之后，我们会习惯性加水试一下是否漏胶，建议用蒸馏水而不是自来水测试，测试结束后要将玻璃板之间的水倒干净，用滤纸吸干残留的水;
灌胶之前要将配好的试剂充分混匀，灌胶的过程中要掌握好速度，缓慢加样，避免产生气泡，
然后缓缓加入无水乙醇封胶，该步操作时速度一定要慢，防止把胶面冲变形;在等待分离胶凝固的过程中，不要总去摇晃观察，
温度较高的情况下，30min左右就会凝固，冬天气温较低可能需要较长时间。
分离胶液面不平，也会影响后期蛋白电泳的效果。
4、转膜
转膜前需在一张转膜板两侧各放置3-4张滤纸(两侧数量相同)。
切记不要用手直接接触PVDF膜和滤纸，手上的油脂会对其造成污染，同时要佩戴干净的手套，全程尽量使用镊子夹取。
同时要赶走每一层之间的气泡。
5、转膜
转膜时要使整个机器之余冰水混合物中，我们常用220V或者其他高电压进行，
机器温度升高，会使蛋白降解，也就是我们转膜后，用丽春红染色发现条带跑糊，发光后条带和背景都会脏的一塌糊涂。
6、孵育抗体
我们孵育一抗的时间大多会选择4度过夜，但是具体多长时间算合适，其实没有硬性规定。
但是二抗孵育的时间不宜过长，一般是室温下摇床孵育两小时，并要清洗干净，否则显影效果，背景会脏。
7、发光液配置
像大部分实验室使用的ECL发光液，A液和B液按照1：1的比例配置，
发光液要求现用现配，每次根据使用量合理配置用液量，
发光液配置时间过长同样会引起发光效果不好，背景脏或者漆黑一片。