干细胞

人胎盘羊膜间充质干细胞

人胎盘羊膜间充质干细胞

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货号: QC-05-004
生长状态:
年限: 2年
运输方式: 干冰
器官来源: 胎盘
是否是肿瘤细胞:
细胞形态: 长梭型
免疫类型:
物种来源:
相关疾病:
组织来源: 人胎儿胎盘羊膜
品系:
ATCC Number:
细胞类型: 干细胞
肿瘤类型:
供应商: 钦诚生物
数量: 1.0
规格: 1×10^6
1. 产品基本信息
产品名称:人胎盘羊膜间充质干细胞
产品编号:QC-05-004
规格:(1-1.5)×10^6 个细胞/管
冻存代次: P4
保存条件: 液氮
警告:产品冻存液中含有DMSO,具有潜在的生物公害,操作者请谨慎处理。

2. 产品介绍
人胎盘羊膜间充质干细胞来自人胎儿胎盘羊膜,是一类具有自我更新和多向分化潜能的成体干细胞,具有来源广泛、可塑性强、对供者无不利影响,无异体免疫排斥反应、避免伦理争议等诸多优点,因此成为组织工程、细胞治疗等基础研究或应用领域的理想种子细胞,具有广阔的临床应用前景,可用于治疗内分泌系统、神经系统、循环系统、免疫系统、血液系统等疾病,同时可作为细胞模型被广泛应用于体内外的细胞增殖、移植、分化和免疫调控研究。

3. 质量控制
(1) 本产品经过了病毒,细菌,真菌,支原体。
(2) 本产品经过细胞复苏活率,流式鉴定,细胞周期,生长曲线,倍增时间,克隆形成率,分化潜能检测。

4. 产品特性
(1) 本产品复苏细胞活率达至80%以上。
(2) 操作规范的条件下,本产品具有良好的传代能力,至少传至10代。
(3) 本产品具有较强的分化潜能,能分化为成骨细胞、脂肪细胞、软骨细胞等。
(4) 流式检测鉴定(CD73+,CD90+,CD105+)≥95%,(HLA-DR+、CD45+、CD34+)≦2%。(5) 该产品仅用于科研,不可应用于临床治疗或其他方面。

5. 处理原则
(1) 在无菌的条件下处理该产品。
(2) 人胎盘羊膜间充质干细胞复苏培养后,建议冻存一部分细胞作为备份。
(3) 建议用于科研的细胞代次不超过10代。
(4) 建议细胞接种密度是(1.0-1.3)×104个活细胞/cm2,具体数量根据细胞生长状态加以调整。

6. 人胎盘羊膜间充质干细胞的复苏
(1) 所需材料 人胎盘羊膜间充质干细胞完全培养基其他选择培养基,配比如下:100ml DMEM/F12培养基 + (10~15) ml FBS +(1~2ml) 非必须氨基酸 + (1~2ml) L-谷氨酰胺 Phosphate-BufferedSaline(1×PBS)
(2) 复苏步骤 从低温容器中取出冻存管,迅速置于37°C水浴中连续晃动,1min内快速解冻; 在无菌条件下,将完全解冻的细胞悬液转移至含有10-15ml细胞培养基的离心管中; 1500 rpm 离心5 min,吸弃离心后上清; 加入适量的新鲜培养基重悬细胞,进行细胞计数及活率检测; 根据细胞数量及活率,用完全培养基调整细胞接种密度为(1.0-1.3)×104个活细胞/cm2,将细胞悬液加入培养器皿中,轻轻摇晃使细胞均匀分布; 在培养器皿上做好标记,转移至5%CO2、37℃、饱和湿度为95%的CO2培养箱中培养。 观察细胞状态,隔天换液;当细胞汇合度达到80-90%时,可进行传代处理。 图1 已贴壁的人胎盘羊膜间充质干细胞(40× )

7. 人胎盘羊膜间充质干细胞的传代
(1) 所需材料 人胎盘羊膜间充质干细胞完全培养基其他可用培养基,配比如下:100ml DMEM/F12培养基 + (10~15) ml FBS + (1~2ml) 非必须氨基酸 + (1~2ml) L-谷氨酰胺 Phosphate-Buffered Saline(1×PBS) 0.25%胰蛋白酶溶液
(2) 传代步骤 提前将完全培养基、PBS、胰蛋白酶溶液放置室温。 在无菌条件下,小心吸弃培养器皿中的培养基。 用1×PBS清洗细胞2次,注意操作轻柔,不要损害贴壁细胞。 加入0.25%胰蛋白酶溶液消化细胞(根据所用培养器皿确定加入量),室温静置消化2-3min,显微镜下观察消化情况。 当观察至80%以上细胞变圆时,加入完全培养基终止消化。 用移液管吸取溶液,反复吹打培养器皿皿底。吹打时动作轻柔,尽量避免产生气泡。 将细胞悬液转移至离心管中,1500rpm离心5min。 吸弃上清,加入适量完全培养基重悬细胞沉淀,计数。 调整细胞密度为(1.0-1.3)×104个活细胞/cm2,将细胞悬液加入培养器皿中,轻轻摇晃使细胞均匀分布。 在培养器皿上做好标记,转移至5%CO2、37℃、饱和湿度为95%的CO2培养箱中培养。 显微镜下观察细胞状态,当汇合度达到80-90%时,可进行下一次传代处理。

8. 人胎盘羊膜间充质干细胞的冻存
(1) 所需材料 人胎盘羊膜间充质干细胞完全培养基其他可用培养基,配比如下:100ml DMEM/F12培养基 + (10~15) ml FBS + (1~2ml) 非必须氨基酸 + (1~2ml) L-谷氨酰胺 Phosphate-BufferedSaline(1×PBS) 0.25%胰蛋白酶溶液 间充质干细胞冻存液其他可用冻存液配方:90% FBS + 10% DMSO
(2) 冻存步骤 提前将培养基、PBS、胰蛋白酶溶液放置室温。 在无菌条件下,小心吸弃培养器皿中的培养基。 用1×PBS清洗细胞2次,注意操作轻柔,不要损害贴壁细胞。 加入0.25%胰蛋白酶溶液消化细胞(根据所用培养器皿确定加入量),室温静置消化2-3min,显微镜下观察消化情况。 当观察至80%以上细胞变圆时,加入完全培养基终止消化。 用移液管吸取溶液,反复吹打培养器皿皿底。吹打时动作轻柔,尽量避免产生气泡。 将细胞悬液转移至离心管中,1500rpm离心5min,同时取样进行细胞计数。 弃离心后上清,根据细胞计数结果,使用细胞冻存液重悬细胞,调整细胞密度为105-106个/ml,轻轻吹打混匀后分装至冻存管中,旋紧冻存管盖。 冻存管做好标记,进行程序降温冻存,可选择冻存盒或程序降温仪其中一种方式冻存。1) 冻存盒冻存方法:冻存盒直接放于-80℃,第二天将细胞转移至液氮中长期冻存;2) 程序降温仪冻存方法:按照间充质干细胞预设程序程序降温,降温至-80℃以下后直接将细胞转移至液氮中长期冻存。