细胞系

RPMI 8226(人多发性骨髓瘤外周血B淋巴细胞)

RPMI 8226(人多发性骨髓瘤外周血B淋巴细胞)

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RPMI 8226 人多发性骨髓瘤外周血B淋巴细胞

Cat NO.: QC-0564

细胞名称

RPMI 8226(人多发性骨髓瘤外周血B淋巴细胞)

种属

年龄(性别)

男;61岁

生长特性

悬浮

细胞形态

淋巴母细胞样

背景描述

没有证据表明,RPMI 8226细胞能产生重链(细胞质型或分泌型)。

生长培养基

RPMI-1640+10% FBS+1% P/S

培养条件

气相:空气,95%;CO2,5%

温度:37℃

细胞操作说明
请仔细阅读本操作说明及相应的细胞说明书。
一、 收货
<1>本公司细胞发货有四种形式:T25瓶、离心管、血清及干冰。
① T25是用T25细胞培养瓶直接发货的形式。收到细胞后,拆开包装T25瓶的自封袋,不拆封口膜,表面喷75%酒精消毒后显微镜观察细胞状态(有条件可以拍下此时细胞照片)。将细胞放入37度培养箱平衡两小时以上,再处理细胞。首先将T25中培养基取出装好备用,如细胞密度高于80%,可以直接消化传代,相反则加入5-6mL培养基放回培养箱继续培养即可。
② 离心管是用15mL离心管发货的方式,只用于悬浮细胞发货。收到细胞后消毒处理及平衡参考上述T25瓶。平衡完成后,离心(1000rpm,3min)收集细胞,弃上清,用新的培养基重悬细胞并接种至培养瓶或皿中,放回培养箱继续培养。
③ 血清是用牛血清直接发货的形式,是细胞冻存管加入含有细胞的牛血清的形式。收到细胞后,拆开自封袋,冻存管表面喷75%酒精消毒后,在超净台中打开冻存管,将细胞用1mL枪头轻轻几次以将细胞吹匀,接种至含有预热的培养基的培养瓶或皿中,显微镜下观察细胞是否吹匀,如果没有吹匀,继续吹匀至3-5个细胞一团,放回培养箱继续培养。
④ 干冰是用本公司冻存液冻存细胞后,直接用干冰将冻存的细胞冷冻发货的形式。收到细胞后按照细胞复苏的步骤操作即可。
<2>相关问题
① 如不能在收到细胞后及时操作细胞,T25及离心管发货的细胞可以消毒后在37度过夜,血清发货的细胞可以在室温下静置1-2天(注意不要放冰箱),干冰发货的可以在确认干冰未完全升华时将细胞直接放回液氮或者-80度冰箱,若干冰完全升华,请即刻复苏细胞。
② T25瓶及离心管在培养箱平衡是为了让细胞尽快适应培养箱环境,同时使部分因运输导致脱落的细胞贴壁,此步骤非常必要。T25瓶如果在显微镜下可以看到部分不贴壁的细胞,可以收集上清后离心(1200rpm,5min)后,将沉淀用新的培养基重悬后接种至新的培养瓶或皿中。
③ 部分细胞在运输过程中,由于不断震荡及环境不适,可能导致细胞破碎死亡,从而使培养基中漂浮很多细胞碎片及颗粒状物质。这种情况下,平衡后,贴壁细胞用PBS洗两遍在加新的培养基培养或者传代至新瓶中培养即可;悬浮细胞可以离心(1000rpm,3min)收集细胞,并用PBS重悬后再离心一次,再用新的培养基重悬并接种细胞。
二、 细胞培养及传代
<1>细胞培养
① 细胞请于细胞培养箱中培养,大部分细胞是37℃,5% CO2,湿度100%环境下培养的。有极少部分细胞培养条件不一致,请仔细阅读相应的细胞说明书,使用正确的培养基及培养条件;
② 细胞于培养瓶或皿中培养,加入适量说明书上标注的细胞相应完全培养基(一般液面高度2-3mm即可)。
<2>细胞传代(以下步骤适用于10cm皿)
① 细胞培养至密度达80%以上时即可传代,先将细胞培养基取出3mL用15mL离心管装好,其他培养基全部吸干舍弃;
② 培养皿加入2-3mL无菌PBS,轻轻晃动皿,使PBS浸洗到皿底所有部位,PBS吸干舍弃;
③ 加入1mL胰酶,轻轻晃动皿,使胰酶浸没到皿底所有部位,将皿盖好放入培养箱中消化;
④ 3min后,显微镜下观察细胞,若大部分细胞不再贴壁,即可加入第一步收集的培养基混匀;若细胞还是贴壁,放回培养箱继续消化至不贴壁为止;
⑤ 将细胞悬液均匀分成几份,分别加入不同培养皿中,补加新培养基后放回培养箱培养。
<3>相关问题
① 部分细胞在传代后时,会有以下现象:细胞内会有黑色小点、细胞间隙有些颗粒物、培养基漂浮一些死细胞或者细胞长的极慢。出现以上现象时,可以咨询本公司技术人员此现象是否正常及相关处理方式,不要频繁换液,大多数细胞1周换液2-3次即可。
② 细胞碎片较多、背景较脏时,贴壁细胞用PBS漂洗两次、悬浮细胞打散后低速离心(900rpm,3min)能有效改善。
③ 传代比例建议1:2-1:3,长得比较快的细胞可以1:3,比较慢的按1:2传代。传代后,建议不要使用传代前培养所使用的培养基,会有大量细胞碎片甚至导致细胞死亡的风险。
④ 细胞状态不好或者生长极慢的时候,可以通过增加血清浓度调整细胞状态及生长速度。
⑤ 请不要随意更换培养基,因实验需要,可以逐步驯化。
悬浮传代:混匀细胞,收集细胞悬液900-1000rpm离心3min,弃上清。再加5ml PBS重悬细胞,再离心后,用完全培养基重悬接种到新的培养皿。第二次PBS重悬是为了去除碎片,如果平时碎片比较少,传代时可以省略PBS重悬的步骤;如果碎片很多,建议PBS多洗一次。
 
三、 细胞冻存
<1>冻存操作
① 冻存液配方:建议使用92%FBS+8%DMSO,客户自身实验室所使用的冻存液也可以适用,血清浓度不低于30%,DMSO含量不高于12%即可。
② 收集细胞按照以上细胞传代步骤操作至第④步后,将细胞悬液收集入15mL离心管,离心(1200rpm,3min);
③ 弃上清,加入配制好的冻存液,重悬细胞,悬液加入无菌冻存管中;
④ 将冻存管在4℃静置10min,后将之正置于室温下的厚壁有盖泡沫盒中,盖紧盒盖,放入-80℃冰箱过夜,第二天放入液氮即可长期保存。
<2>相关问题
① 10cm皿的细胞长满一般可以冻存2-3管,部分细胞长的比较慢,冻存的细胞密度要稍微大点,以防止复苏后生长困难。
② 冻存液中含的DMSO请使用细胞级DMSO,同时浓度不要太高。部分细胞在10%DMSO条件下冻存会死亡,所以DMSO浓度5%-8%是比较推荐的浓度。
③ 细胞冻存及复苏遵循慢冻快融的原则,即冻存时温度不能急剧下降,应控制温度缓慢下降。复苏时应快速融化,融化后尽快加入培养基中。
④ 冻存时建议设置冻存检测,即取0.2-0.3mL的冻存液重悬的细胞于一个冻存管中,与正常体积冻存的细胞共同冻存,至液氮后复苏检查冻存结果。冻检合格前,留一部分细胞继续培养,以防万一。
四、 细胞复苏
<1>复苏步骤
① 将冻存细胞从液氮中取出后迅速放入37℃温水中摇晃融化,时间1min左右;
② 于1000rpm离心1min,弃冻存液,加入1mL新的完全培养基重悬细胞;
③ 接种至新培养瓶或皿中,补加足量完全培养基,放入培养箱中培养。
<2>相关问题
① 复苏过程应迅速操作,时间不能太长。
② 复苏过程中注意污染,小心操作。